Geenit ohjaavat kaikkien - niin luontaisten kuin geenitekniikan avulla tuotettujen - proteiinien synteesiä. Nisäkäsgeenien ilmentäminen sellaisenaan bakteereissa on mahdotonta DNA:n proteiinia koodaamattomien intronien takia, joten käänteistranskriptaasien löytäminen viruksista vuonna 1970 oli hyvin merkittävää; ne mahdollistivat geenien eristämisen lähetti-RNA:n kautta.

Tämän opinnäytetyön tavoitteena oli eri fuusioproteiinien kloonaaminen, tuotto E. colissa ja karakterisointi. M-MuLV-käänteistranskriptaasiin liitettiin kuuden histidiinin häntä, His-tag, proteiinin puhdistusta varten ja lisäksi pieni proteiini joko C- tai N-terminaaliseen päähän eri pituisten linkkerien avulla. Tarkoituksena oli löytää sopivin fuusio, jonka myötä RT-entsyymin ominaisuudet, kuten termostabiilisuus, prosessiivisuus ja fideliteetti, paranisivat.

Viiden eri konstruktin kloonaaminen tehtiin perusmolekyybiologisten menetelmien avulla. Puhdistusvaiheessa affiniteettikromatografia yksinään ei riittänyt kontaminoivien endo- ja eksonukleaasien poistamiseen, vaan jouduttiin käyttämään kolmea eri kromatografiapylvästä. His-tag ei muuttanut M-MuLV RT:n ominaisuuksia verrattaessa sitä Finnzymes Oy:n kaupalliseen M-MuLV RT RNase H+:aan. Jos se olisi haitannut entsyymin toimintaa, histidiini-hännällisten fuusioiden tuottamista ei olisi kannattanut jatkaa.

Tuotettaessa fuusioproteiineja niiden liukoisuus osoittautui huonommaksi kuin pelkällä M-MuLV RT:lla. Madaltamalla tuottumislämpötilaa, pidentämällä induktioaikaa sekä suurentamalla kasvatustilavuutta, saatiin isompia solumassoja ja enemmän entsyymiaktiivisuutta. Tähän perustuen entsyymin liukoisuusominaisuudet olivat fuusion myötä muuttuneet.

qRT-PCR:n avulla testattiin puhdistettujen entsyymien kykyä toimia käännettäessä RNA:ta eri pitoisuuksilla cDNA:ksi.

Kaikkia neljää eri fuusiota ei ehditty karakterisoida tämän opinnäytetyön aikana, mutta tutkimuksia jatketaan edelleen. Thermo Fisher Scientificin tuotekehitykseen kuuluvien salassapitosyiden takia muun muassa fuusiopari, linkkerit sekä kloonaamisessa käytettyjen alukkeiden sekvenssit on jätetty kertomatta.