Haku

Sperm flagellar protein 2 expression in mouse tissues and transfection in mIMCD3 cells

QR-koodi

Sperm flagellar protein 2 expression in mouse tissues and transfection in mIMCD3 cells

Miesten hedelmättömyys on kasvava ongelma länsimaissa. Värekarvasairaudet voivat aiheuttaa miesten hedelmättömyyttä. Siittiöiden kehityksen tutkimus voi valaista syitä siittiöiden rakenteellisten ja toiminnallisten vikojen taustalla. Sperm flagellar protein 2 (Spef2) -geeni ilmentyy kudoksissa, joissa on liikkuvia värekarvoja, ja se on välttämätön siittiön hännän kehitykselle ja liikkuvuudelle. Spef2-knockout hiirimallin avulla tutkittiin Spef2:n toimintaa värekarvoissa ja siittiöissä. Liikkuvien värekarvojen toimintahäiriöt aiheuttavat hiirimallilla kroonisia hengitystieinfektioita, siittiövioista johtuvaa hedelmättömyyttä ja vesipäätä. Tämän tutkimuksen tavoite oli kehittää vasta-aine, joka sitoutuu SPEF2:n adenylaattikinaasidomeeniin (KAD). Antigeeni vasta-ainetta varten tuotettiin E.colissa ja puhdistettiin affiniteettikromatografialla. Western blot-menetelmällä ekspressio havaittiin kiveksessä, lisäkiveksessä, keuhkoissa, munanjohtimessa ja mahdollinen uusi isoformi aivoissa. Kaksi SPEF2-isoformia puuttui poistogeenisten hiirten kiveksistä. Kudosvärjäyksissä SPEF2 lokalisoitui spermatosyytteihin, spermatideihin, spermatidien mansettiin, siittiön häntään, Sertolin soluihin ja henkitorven epiteelisolujen värekarvoihin. Toinen tavoite oli kehittää fluoresoiva solulinja, jolla tutkitaan SPEF2:n kuljetusta värekarvaan. Kolme SPEF2-GFP fuusioproteiinia ilmennettiin eri mIMCD3-solulinjoissa. 5´TE-GFP, KAD-GFP ja 3´TE-GFP vastasivat kivesspesifisen Spef2-sekvenssin eri toiminnallisia alueita. Fuusioproteiinien paikantuminen värekarvaan tai siihen liittyviin rakenteisiin, kuten basal bodyyn, viittaa että Spef2:lla olisi useita värekarvalokalisaatiosignaaleja.

Tallennettuna: